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/ Shareware Overload Trio 2 / Shareware Overload Trio Volume 2 (Chestnut CD-ROM).ISO / dir26 / med9408c.zip / M9480539.TXT < prev    next >
Text File  |  1994-08-20  |  3KB  |  43 lines
  1.        Document 0539
  2.  DOCN  M9480539
  3.  TI    Conjugation of recombinant reverse transcriptase of HIV-1 to
  4.        beta-D-galactosidase from Escherichia coli for ultrasensitive enzyme
  5.        immunoassay (immune complex transfer enzyme immunoassay) of anti-HIV-1
  6.        IgG.
  7.  DT    9410
  8.  AU    Hashinaka K; Hashida S; Saitoh A; Nakata A; Shinagawa H; Oka S; Shimada
  9.        K; Ishikawa E; Department of Biochemistry, Medical College of Miyazaki,
  10.        Japan.
  11.  SO    J Immunol Methods. 1994 Jun 24;172(2):179-87. Unique Identifier :
  12.        AIDSLINE MED/94308543
  13.  AB    Recombinant reverse transcriptase (RT) of HIV-1 was conjugated to
  14.        beta-D-galactosidase from Escherichia coli in three different ways.
  15.        Maleimide groups were introduced into beta-D-galactosidase molecules
  16.        using N,N'-o-phenylenedimaleimide in the absence (method I) or presence
  17.        (method II) of N-ethylmaleimide or into beta-D-galactosidase molecules,
  18.        which had been treated with excess of 4,4'-dithiodipyridine to block
  19.        thiol groups, using N-succinimidyl-6-maleimidohexanoate (method III).
  20.        Subsequently, the maleimide groups were reacted with thiol groups
  21.        introduced into recombinant RT molecules using
  22.        N-succinimidyl-S-acetylmercaptoacetate. The conjugates were tested by a
  23.        sensitive enzyme immunoassay (immune complex transfer enzyme
  24.        immunoassay). The immune complex consisting of 2,4-dinitrophenyl-bovine
  25.        serum albumin-recombinant RT conjugate, anti-HIV-1 IgG and recombinant
  26.        RT-beta-D-galactosidase conjugate was captured by polystyrene beads
  27.        coated with (anti-2,4-dinitrophenyl group) IgG, eluted with N
  28.        epsilon-2,4-dinitrophenyl-L-lysine and transferred to polystyrene beads
  29.        with (anti-human IgG gamma chain) IgG. The conjugate prepared by method
  30.        III, which showed the least polymerization, the least loss of the
  31.        specific enzyme activity and the lowest nonspecific binding, improved
  32.        the sensitivity of the enzyme immunoassay for anti-HIV-1 IgG
  33.        approximately 30-fold compared with RT-horseradish peroxidase conjugate.
  34.  DE    beta-Galactosidase/*CHEMISTRY  Animal  *Antigen-Antibody Complex
  35.        Escherichia coli/*ENZYMOLOGY  HIV Antibodies/*ANALYSIS  IgG/*ANALYSIS
  36.        Immunoenzyme Techniques  Maleimides/CHEMISTRY  Rabbits  Recombinant
  37.        Proteins/CHEMISTRY  Reverse Transcriptase/*CHEMISTRY  Sensitivity and
  38.        Specificity  JOURNAL ARTICLE
  39.  
  40.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  41.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  42.  
  43.